-
-
cIEF-Bestimmung - Isoelektrische Fokussierunghochaufgelöste und absolut reproduzierbare Auftrennung von Proteinen nach Ladungsunterschieden
Die isoelektrische Fokussierung in der Kapillare ist eine schnelle und einfache Alternative zur herkömmlichen Methode der isoelektrischen Fokussierung von Gelen in der Proteincharakterisierung.
Der Vorteil der CE-Methode ist zum einen die einfache Automatisierbarkeit und zum anderen der Verzicht auf die Anfärbung der Proteine.
Die Reproduzierbarkeit mit kleiner 0.1 % relativer Standardabweichung bei der Bestimmung der pI-Werte und kleiner 0.3 % bei der Quantifizierung der wichtigen Isomerformen ist einzigartig.
Die pharmazeutische Industrie benutzt diese Methode zum Vergleich der einzelnen Produktionschargen, da kleinste Unterschiede in der Glykolysierung oder Deamidierung angezeigt werden.
Neue pI-Marker auf Peptid-Basis ergeben schmale Banden und erlauben das genaue Bestimmen von pI-Werten unbekannter Proteine.
Vorteile der Methode
- Einfache Automatisierbarkeit (validierte Kits)
- Keine Anfärbung der Proteine nötig
- Reproduzierbarkeit von kleiner 0.1% Standardabweichung für PI-Bestimmung
- Reproduzierbarkeit von kleiner 0.3% Standardabweichung für Quantifizierung
- exakte Bestimmung von unbekannten Proteinen über neue pI-Marker
Technologie
- Mobilisierung erfolgt chemisch durch Wechsel des Katholyten
- Optimieren der Läufe erfolgt durch Zugabe von Harnstoff mit einer Konzentration von zu bis 6 molar
- sehr stabile pI-Gradienten und reproduzierbare Migrationszeiten durch Stabilisatoren auf der Anoden und Kathodenseite
- Unterdrückung geringster Präzipitation für optimale Trennung
- neue pI-Marker (kurze Peptide mit nur einigen Aminosäuren in der Sequenz) ermöglichen scharfe Peaks zum besseren Kalibrieren des Systems
Bestandteile des cIEF Kits: (A80976)
- cIEF Kit :
- pI Marker
- 1 Neutrale Kapillare
- cIEF Gel - Diverse ausführliche Arbeitsanleitungen für einen pI Bereich von 3 bis 10 und für monoklonale Antikörper liegen vor.
